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基因定點突變技術

體外定點突變技術是當前生物學各領域研究中的一種重要實驗手段，是改造、優化基因的便捷方案，是探索啟動子調節位點的有效手段，也是研究蛋白質結構和功能之間的復雜關系的有力工具。蛋白質的結構決定其功能，二者之間的關系是蛋白質組研究的重點之一。對某個已知基因的特定堿基進行定點改變、缺失或者插入，可以改變對應的氨基酸序列和蛋白質結構，對突變基因的表達產物進行研究有助于人類了解蛋白質結構和功能的關系，探討蛋白質的結構/結構域。CRISPR-Cas9系統的靶向雙鏈斷裂（DSB），基因組通常通...

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藥廠的清潔和消毒措施

對于制藥企業而言，當某一產品生產完畢后，總會有一些微生物和少許原輔料殘留于設備中，在溫度和濕度達到一定程度時，微生物能夠與原輔料中殘留有機物出現無法物化反應，通過大量繁殖能夠形成不同類型代謝物，這些代謝物會從一定程度上影響藥物藥效甚至會產生毒副作用，從而使制藥企業每當生產一段時間或者更換產品后會存在產品質量問題，因此無論維修設備或設備空閑一段時間，需要實現設備清潔工作。對于制藥企業來說，清潔主要針對設備中殘留的微生物或者各種代謝物，其總量在不影響藥品規定的質量、藥效及安全性。...

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CRISPR/Cas9 基因編輯和NGS驗證

CRISPR/Cas9基因編輯技術需要通過下一代測序(NGS)來驗證，能夠在核苷酸水平分辨率下進行大規模評估基因編輯的準確性和可靠性。高效、可自動化和可擴展的CIRCLE-seq是一種體外NGS測定，可以對CRISPR介導的切割進行靈敏的脫靶檢測。CRISPR/Cas9基因編輯技術CRISPR代表成簇規律間隔的短回文重復序列。這些重復的DNA片段最初來源于病毒病原體，并作為模板將CRISPR相關蛋白9(Cas9)核酸內切酶引導至新入侵的病毒。當Cas9遇到同源病毒序列時，它會...

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HE染色實驗中常見問題及應對措施

HE染色實驗常見問題及解決方案HE染色是石蠟切片技術中常用的染色方法之一，簡稱為蘇木精-伊紅染色法。該方法使用堿性的蘇木精染液將細胞核內的染色質和胞質內的核酸染成紫藍色，同時使用酸性染料伊紅將細胞質和細胞外基質中的成分染成紅色。1、切片出現白色斑點原因：(1)烘片溫度過低，導致玻片未干透；(2)切片在二甲苯中停留時間過短；(3)二甲苯使用時間過長，導致脫蠟不效果不好。對策：若玻片未干透，先用無水乙醇去除水分，再重新脫蠟。若斑點是由于停留時間過短或使用時間過長造成的，則需重新操...

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穩定細胞株的篩選步驟

穩定細胞株是一種常用于基因表達、藥物篩選和蛋白質表達等領域的工具。但是，穩定細胞株的篩選需要經過一系列的步驟和實驗，下面介紹一下穩定細胞株篩選的兩種方法和穩定細胞株的篩選簡要步驟：一、質粒轉染法先把質粒整合到染色體上后，用相應的質粒DNA中的抗性標志來篩選該細胞系，單克隆篩選穩定細胞株。1、篩選濃度測定，以10~14天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度；2、進行細胞接種，轉染實驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉染當天細胞密度應達到60...

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