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影響瓊脂糖凝膠電泳制膠的幾個(gè)因素

對(duì)于一般的分析工作，特別是定量分析工作來(lái)講，人們強(qiáng)調(diào)制備的凝膠要有較好的可重復(fù)性。如果制備得到的凝膠本身沒(méi)有重復(fù)性，比如孔徑前后兩次凝膠相差頗大，那么在這樣的條件下，所得到的分析結(jié)果，其可信性就有問(wèn)題，往往會(huì)使幾次結(jié)果不能重復(fù)。所以，為了要獲得可靠的分析結(jié)果，在制膠時(shí)對(duì)能影響凝膠聚合的種種因素必須加以控制。有哪些主要因素，又怎樣來(lái)控制它們的條件，分別簡(jiǎn)述如下：(1)制備凝膠用的主要試劑(a)丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺至少是分析純級(jí)的試劑。存放時(shí)間一般不超過(guò)1年,如果存放時(shí)間過(guò)長(zhǎng)...

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細(xì)胞培養(yǎng)前的滅菌處理技術(shù)

無(wú)論從事何種細(xì)胞培養(yǎng)，無(wú)菌技術(shù)都是絕對(duì)最重要的部分。細(xì)胞培養(yǎng)前的無(wú)菌處理技術(shù)分為三部分即：①工作環(huán)境及表面的處理；②細(xì)胞培養(yǎng)所用玻璃及塑料制品的處理；③實(shí)驗(yàn)者的操作技術(shù)；還有哺乳動(dòng)物細(xì)胞的處理及維持細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的培養(yǎng)液的無(wú)菌處理。1.工作環(huán)境的無(wú)菌處理在細(xì)胞培養(yǎng)早期，研究者可以依靠操作技術(shù)和盡可能地靠近火焰以達(dá)到細(xì)胞的無(wú)菌化，隨著工作環(huán)境的機(jī)械學(xué)發(fā)展，其無(wú)菌化程度已得到大大提高，免去了實(shí)驗(yàn)者手指被燒灼的痛苦。層流超凈臺(tái)是使工作臺(tái)無(wú)菌化有效的手段，組織培養(yǎng)可在相對(duì)密閉而幾乎無(wú)...

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懸浮細(xì)胞的電融合轉(zhuǎn)染技術(shù)簡(jiǎn)介

懸浮細(xì)胞的電融合轉(zhuǎn)染技術(shù)融合懸浮細(xì)胞的步驟與電穿孔的很類(lèi)似，只是在進(jìn)行高強(qiáng)度的電場(chǎng)脈沖前后，必須用低幅、高頻電場(chǎng)使細(xì)胞排成一條鏈。1用融合介質(zhì)（FM）洗懸浮細(xì)胞兩次，然后懸于FM中。洗滌細(xì)胞時(shí)，在臺(tái)式離心機(jī)上1000rpm下離心3分鐘，得到細(xì)胞沉淀，棄去上清液將細(xì)胞懸于新鮮FM介質(zhì)中。2將懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)移到相應(yīng)的融合室內(nèi)。假如要使兩種不同的細(xì)胞彼此融合，轉(zhuǎn)移前要充分混合。3啟動(dòng)介電電泳場(chǎng)，其振幅通常小于200V/cm，頻率在2MHz以內(nèi)，用顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞是否排成一條鏈，調(diào)節(jié)振幅和...

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發(fā)酵罐中微生物生長(zhǎng)特性及其在發(fā)酵工業(yè)中的應(yīng)用

微生物是發(fā)酵工業(yè)的靈魂，對(duì)微生物控制的發(fā)酵過(guò)程進(jìn)行優(yōu)化，我們要了解發(fā)酵罐中微生物的生長(zhǎng)反應(yīng)特性。微生物細(xì)胞生長(zhǎng)是細(xì)胞個(gè)體內(nèi)許多化學(xué)反應(yīng)的綜合結(jié)果。這些反應(yīng)包括合成提供其它反應(yīng)需要的吉布斯自由能；利用底物合成結(jié)構(gòu)單元，再聚合成大分子物質(zhì)，供合成細(xì)胞所需等。正常情況下，微生物細(xì)胞為了確保有序和高效生長(zhǎng)，必須將這些反應(yīng)有機(jī)地結(jié)合在一起，經(jīng)濟(jì)地分配胞內(nèi)各代謝途徑的通量。大腸桿菌是發(fā)酵研究中用得最多的微生物。在大腸桿菌生長(zhǎng)過(guò)程中前人已觀察到下列現(xiàn)象∶(1)在大腸桿菌快速生長(zhǎng)期間，生物合...

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懸浮細(xì)胞電穿孔轉(zhuǎn)染法的實(shí)驗(yàn)流程詳解

[實(shí)驗(yàn)原理]當(dāng)細(xì)胞置于非常高的電場(chǎng)中，細(xì)胞膜就變得具有通透性，能讓外界的分子擴(kuò)散進(jìn)細(xì)胞內(nèi)，這一現(xiàn)象稱為電穿孔。運(yùn)用這一技術(shù)，許多物質(zhì)，包括DNA、RNA、蛋白質(zhì)、藥物、抗體和熒光探針都能載入細(xì)胞。作為一種基因轉(zhuǎn)導(dǎo)方法，電穿孔已被廣泛用于各種細(xì)胞類(lèi)型，包括細(xì)菌、酵母、植物和動(dòng)物細(xì)胞；而且，它還能作為注射方法（稱為電注射），把各種外源物質(zhì)引入活細(xì)胞。與其他常用的導(dǎo)入外源物質(zhì)的方法相比，電穿孔具有很多優(yōu)點(diǎn)。一.不必象顯微鏡那樣使用玻璃針，不需要技術(shù)培訓(xùn)和昂貴的設(shè)備，可以一次對(duì)成百萬(wàn)...

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